人源发酵乳杆菌LactobacillusfermentumLF-12中水解苦丁茶二咖啡奎尼酸酯酶的纯化、分离和分子克隆
FoodFunction
●成果介绍
研究背景
苦丁茶作为一种茶的代用品，与茶叶一样在中国被广为饮用。而苦丁茶实际上是一类代茶用植物的统称，用于加工苦丁茶的植物原料有6个科11种之多，如冬青科的苦丁茶冬青、大叶冬青、枸骨和木犀科的女贞等，但主要原料为冬青科的苦丁茶冬青、大叶冬青和枸骨。苦丁茶中含有多酚类、皂苷、生物碱和黄酮类等生物活性成分，因而具有很好的抗氧化、降血压、降脂、抑菌等功效。苦丁茶作为一种具有功能性的苦味植物饮品，已有多年的饮用历史。据报道，咖啡酰奎尼酸（CQA）及衍生物单咖啡酰奎尼酸（MonoCQAs）和二咖啡奎尼酸（DiCQAs）等占苦丁茶多酚的90%以上。苦丁茶多酚可以完整地到达肠道被肠道微生物代谢，本课题组之前研究发现了苦丁茶DiCQAs在肠道中会被水解为CA、MonoCQAs等，但是关于苦丁茶DiCQAs是被哪些细菌代谢依然未知。本研究旨在发掘水解苦丁茶DiCQAs的特定菌株及其水解酶，为人体肠道微生物代谢多酚提供新证据。
研究结果
（1）从人的粪便中分离出了一种可水解DiCQAs的细菌菌株，通过鉴定该菌株属于发酵乳杆菌，命名为LactobacillusfermentumLF-12；
（2）通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-SepharoseFastFlow阴离子交换色谱、SephacrylS-凝胶色谱纯化L.fermentumLF-12中的DiCQAs水解酶，利用SDS-PAGE和LC-MS/MS鉴定目标蛋白；
（3）在大肠杆菌中异源表达DiCQAs水解酶，其分子量为31.9kDa，等电点、最佳pH和温度分别为4.71、6.5和45°C，Mg2+和Ca2+可以提高酶的活性，Co2+、Cu2+、EDTA和某些有机溶剂是抑制剂。
研究结论
这项研究提供了从人体肠道菌群中分离出的L.fermentumLF-12及其水解酶对DiCQAs进行转化的初步概述，这种生物转化可能会刺激人们对很难被人的胃肠道所利用的多酚的消化和吸收进行深入研究。这也表明人体肠道是与人体共生的微生物发挥其有益健康作用的重要场所。
参考文献
LiuYujin,XieMinhao,WanPeng,ChenGuijie,ChenChunxu,ChenDan,YuShijie,ZengXiaoxiong*,SunYi*.Purification,characterizationandmolecularcloningofadicaffeoylquinicacids-hydrolyzingesterasefromhuman-derivedLactobacillusfermentumLF-12.FoodFunction,,11,-.
本文编辑：佚名
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